Virusul hepatitei A

Hepatita virală A este o boală infecțioasă a oamenilor, caracterizată în principal prin afectare hepatică și manifestată clinic prin intoxicație și icter. Virusul hepatitei A a fost descoperit în 1973 de S. Feinstone (și colab.) folosind metoda microscopiei electronice imune și prin infectarea maimuțelor - cimpanzei și marmosete. Esența metodei de microscopie electronică imună constă în adăugarea de anticorpi specifici (ser de convalescență) în filtratul fecalelor unui pacient cu hepatită A, iar sedimentul este supus microscopiei electronice. Datorită interacțiunii virusurilor cu anticorpi specifici, acestea suferă o agregare specifică. În acest caz, sunt mai ușor de detectat, iar agregarea sub influența anticorpilor confirmă specificitatea agentului patogen. Descoperirea lui S. Feinstone a fost confirmată în experimente pe voluntari.

Virusul hepatitei A este sferic, diametrul virionului este de 27 nm. Genomul este reprezentat de ARN pozitiv monocatenar cu 2,6 mm MD. Nu există supercapsidă. Tipul de simetrie este cubic - icosaedric. Capsida are 32 de capsomere, fiind formată din patru polipeptide (VP1-VP4). Conform proprietăților sale, virusul hepatitei A aparține genului Heparnovirus, familiei Picornaviridae. Din punct de vedere al antigenelor, virusul hepatitei A (HAV - virusul hepatitei A) este omogen. HAV se reproduce bine în organismul cimpanzeilor, babuinilor, babuinilor hamadryas și maimuțelor marmoset. Multă vreme, virusul nu a putut fi cultivat. Abia în anii 1980 a fost posibilă obținerea de culturi celulare în care HAV se reproduce. Inițial, în aceste scopuri s-au folosit linii celulare continue de rinichi de embrion de macac rhesus (cultura FRhK-4), iar acum se utilizează o linie celulară continuă de celule de rinichi de maimuță verde (cultura 4647).

Conform recomandărilor experților OMS, a fost adoptată următoarea nomenclatură a markerilor virusului hepatitei A: virusul hepatitei A - anticorpi HAV împotriva virusului hepatitei A: IgM anti-HAV și IgG anti-HAV.

VHA este o particulă mică cu un diametru de 27-30 nm, având simetrie icosaedrică și posedând omogenitate. Electrograma obținută prin metoda agregării imune relevă particule electron-dense cu capsomeri aranjați simetric, situați superficial. Prin contrast negativ, în preparate se evidențiază atât particule pline, cât și goale. Nucleocapsida VHA, spre deosebire de cea a gripei, nu are proeminențe superficiale și membrană. De asemenea, este important ca virionul VHA să nu aibă o structură în formă de inimă.

Pe baza proprietăților sale fizico-chimice, virusul hepatitei A este clasificat ca aparținând familiei picornavirusurilor, genul enterovirus cu numărul de serie 72. Cu toate acestea, această taxonomie s-a dovedit a fi prea neobișnuită, iar OMS a considerat posibilă păstrarea terminologiei „virusul hepatitei A”.

Ca toate virusurile din familia Picornaviridae, virusul hepatitei A conține acid ribonucleic. Unele laboratoare au demonstrat posibilitatea clonării genomului virusului hepatitei A, ceea ce deschide perspectiva obținerii de vaccinuri.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Rezistența la virusul hepatitei A

Virusul este relativ rezistent la temperaturi ridicate, acizi, solvenți grași (fără lipide), dezinfectanți și tolerează bine temperaturile scăzute. Toate acestea contribuie la conservarea sa pe termen lung în mediul extern. La temperatura camerei, supraviețuiește câteva săptămâni, la 60 °C își pierde parțial infecțiozitatea după 4-12 ore și complet - după câteva minute la 85 °C. Este foarte rezistent la clor, datorită căruia este capabil să pătrundă în apa de la robinet prin barierele instalațiilor de tratare a apei.

Rezumând toate datele, putem caracteriza virusul hepatitei A după cum urmează:

• gazda naturală este omul;
• animale experimentale - marmosete, cimpanzei;
• sursa de infecție sunt fecalele;
• boala este epidemică și endemică;
• cale de transmitere: fecal-orală;
• perioada de incubație - 14-40 zile;
• tranziția la hepatită cronică - nu a fost observată.

Proprietățile imunologice ale HAV sunt următoarele:

• Tulpini prototipice - Ms-1, CR-326, GВG. Toate sunt similare sau identice din punct de vedere imunologic;
• Anticorpii - IgM și IgG, sunt produși ca răspuns la introducerea proteinelor structurale ale virusului și au efect protector;
• I. Efectul protector al gamaglobulinei serice umane - previne sau atenuează boala dacă este administrată înainte de infecție sau în perioada de incubație.

Caracteristicile fizico-chimice ale NAU sunt următoarele:

• Morfologie: particulă sferică fără cochilie cu simetrie cubică, capsida constă din 32 de capsomere;
• Diametru - 27-30 nm;
• Densitatea în CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (particule deschise), 1,33-1,34 (virioni maturi), 1,29-1,31 (virioni imaturi, particule goale);
• Coeficient de sedimentare - 156-160 virioni maturi;
• Acidul nucleic este un ARN liniar monocatenar;
• Greutate moleculară relativă - 2,25 x 10⁶ - 2,8 x 10⁶KD;
• Numărul de nucleotide este de 6.500-8.100.

Stabilitatea HAV sub influențe fizice și chimice este următoarea:

• Cloroform, eter - stabil;
• Clor, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 min - inactivare parțială;
• Cloramină, 1 g/l, 20 °C, 15 min - inactivare completă;
• Formolină, 1:4000, 35-37 °C, 72 h - inactivare completă, 1:350, 20 °C, 60 min - inactivare parțială.

Temperatură:

• 20-70 °C - stabil;
• 56 °C, 30 min - stabil;
• 60 °C, 12 h - inactivare parțială;
• 85 °C, 1 min - inactivare completă;
• Autoclavizare, 120 °C. 20 min - inactivare completă;
• Căldură uscată, 180 °C, 1 oră - inactivare completă;
• OZN, 1,1 W, 1 min - inactivare completă.

Datele prezentate arată că, din punct de vedere al proprietăților sale fizico-chimice, virusul hepatitei A este cel mai apropiat de enterovirusuri. La fel ca alte enterovirusuri, HAV este rezistent la multe soluții dezinfectante și este complet inactivat în câteva minute la 85 °C și prin autoclavizare.

S-a dovedit că virusul hepatitei A se poate reproduce în linii monostrat primare și continue de culturi celulare umane și de maimuță. Reproducerea deosebit de activă a virusului hepatitei A în culturi in vitro se observă atunci când se utilizează ca material de pornire extracte hepatice de la maimuțe bolnave. Trebuie menționat, totuși, că în toate experimentele privind reproducerea virusului hepatitei A pe culturi in vitro, se atrage atenția asupra perioadei lungi de incubație în timpul pasajelor primare (până la 4-10 săptămâni), ulterior acumularea de material genetic viral crește, dar valorile absolute rămân foarte nesemnificative, ceea ce oferă multor cercetători motive să vorbească despre replicarea incompletă a virusului hepatitei A în culturile de țesuturi.

Rezumând datele din literatura de specialitate privind reproducerea virusului hepatitei A în culturi extrațesulare, se poate spune că supraviețuirea pe termen lung a HAV in vitro este incontestabilă. Condițiile optime pentru un nivel ridicat și stabil de replicare a virusului nu au fost încă identificate definitiv, iar acest lucru împiedică studierea proprietăților sale biologice, obținerea unei surse de reactivi pentru producerea de diagnostice și proiectarea vaccinurilor.

În același timp, în literatura de specialitate se pot găsi judecăți mai optimiste cu privire la această problemă. Soluționarea tuturor problemelor legate de cultivarea virusului hepatitei A este o chestiune de viitor apropiat. Studiind condițiile optime pentru reproducerea HAV în cultura celulelor renale embrionare de macac rhesus, au fost identificate două faze: faza de producere a virusului infecțios (până la 6-8 zile la nivelul celui de-al 5-lea pasaj) și faza de acumulare intensivă a antigenului viral. De asemenea, s-a demonstrat că cea mai semnificativă acumulare a antigenului viral are loc în condițiile așa-numitei cultivări cu role (baloane rotative). Această metodă deschide oportunități largi pentru obținerea antigenului de cultură în cantități mari și, în consecință, va apărea materialul sursă pentru prepararea sistemelor de diagnostic și fabricarea vaccinurilor.

Epidemiologia hepatitei A

Virusul hepatitei A este extrem de patogen pentru oameni. Conform OMS (1987), infecția cu un singur virion este suficientă pentru a provoca boala. Cu toate acestea, doza infecțioasă practică este probabil mult mai mare. Singura sursă de infecție este o persoană infectată. Virusul este excretat în cantități mari prin fecale cu 12-14 zile înainte de debutul icterului și în timpul celor 3 săptămâni ale perioadei icterice. Nu s-au constatat diferențe semnificative în excreția agentului patogen la pacienții cu forme icterice, anicterice și asimptomatice de hepatită A. Calea de infecție este fecal-orală, în principal pe cale hidrică, precum și pe cale casnică și alimentară. Principala cale de transmitere a virusului este pe cale hidrică. Infecția prin picături aeriene este, de asemenea, posibilă. Susceptibilitatea populației este universală. Sunt afectați în mare parte copiii sub 14 ani. Boala are o sezonalitate pronunțată toamnă-iarnă.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Simptomele hepatitei A

Perioada de incubație variază de la 15 la 50 de zile, în funcție de doza infecțioasă a virusului, dar în medie este de 28-30 de zile. Odată ajuns în organism, virusul hepatitei A se multiplică în ganglionii limfatici regionali, pătrunde în sânge și apoi în celulele hepatice și provoacă hepatită difuză acută, care este însoțită de afectarea hepatocitelor și a elementelor reticuloendoteliale ale ficatului și de o scădere a funcțiilor sale de detoxifiere și barieră. Deteriorarea hepatocitelor apare nu din cauza acțiunii directe a virusului, ci ca urmare a mecanismelor imunopatologice. Tabloul cel mai tipic al hepatitei A este o formă ciclică icterică acută: perioada de incubație, prodromală (preicterică), perioadă icterică și convalescență. Cu toate acestea, în focarele de infecție se detectează un număr mare de pacienți cu forme anicterice și asimptomatice de infecție, numărul cărora predomină semnificativ față de cele icterice („fenomenul aisberg”).

Imunitatea post-infecție este puternică și de lungă durată, cauzată de anticorpii neutralizanți ai virusului și de celulele de memorie imună.

Diagnosticul microbiologic al hepatitei A

Diagnosticul hepatitei A (cu excepția infecției animalelor - cimpanzei, marmosete, babuini, de care nu dispunem) se bazează pe diverse metode imunologice: RSC, metoda imunofluorescenței, hemaglutinarea aderenței imune (complexul antigen viral + anticorp în prezența complementului este adsorbit pe eritrocite și provoacă lipirea acestora). Cu toate acestea, posibilitățile de utilizare a acestor metode sunt limitate din cauza lipsei antigenelor virale specifice, iar reacția de imunofluorescență necesită biopsie hepatică, ceea ce este nedorit. Metoda microscopiei electronice imune este fiabilă și specifică, dar necesită multă muncă. Prin urmare, până în prezent, singura reacție imunologică acceptabilă este metoda analizei imunosorbente a fazei solide sub formă de IFM sau RIM, în special în modificarea „captării” imunoglobulinelor de clasa M. În țara noastră, a fost propus un sistem de testare în acest scop - „DIAGN-A-HEP”. Principiul de funcționare al acestui sistem de testare este următorul. Mai întâi, anticorpii împotriva imunoglobulinelor din clasa M (antiimunoglobuline M) sunt absorbiți pe pereții godeurilor de polistiren, apoi se adaugă serul pacientului care urmează să fie testat. Dacă acesta conține anticorpi IgM, aceștia se vor lega de anticorpii din clasa M, apoi se adaugă un antigen viral specific (virusul hepatitei A), care se obține prin creșterea în cultură celulară. Sistemul este spălat și i se adaugă anticorpi antivirali marcați cu peroxidază de hrean. Dacă toate cele patru componente ale sistemului interacționează, se formează un „sandwich” cu patru straturi:

• antiimunoglobuline M,
• imunoglobuline M (împotriva virusului hepatitei A - în serul pacientului studiat),
• antigen viral,
• anticorpi antivirali marcați cu enzime.

Pentru a detecta acest complex, se adaugă în godeuri un substrat pentru enzimă. Sub influența enzimei, aceasta este distrusă și se formează un produs colorat. Intensitatea culorii poate fi măsurată cantitativ folosind un spectrofotometru sau un fotocolorimetru.

Avantajul metodei de „captare” a IgM este că anticorpii din această clasă de imunoglobuline apar în timpul răspunsului imun primar și indică stadiul activ al infecției, aceștia dispărând după ce boala a fost dezvoltată. Anticorpii antivirali aparținând clasei IgG, dimpotrivă, persistă mult timp după ce boala a fost dezvoltată, oferind imunitate dobândită. Pentru detectarea virusului hepatitei A a fost propusă o metodă de detectare a ADN-ului: ca sondă se utilizează ADN-ul ARNv complementar.

Tratamentul hepatitei A

Deoarece producția de interferon este perturbată în hepatita virală, tratamentul hepatitei A se bazează pe utilizarea interferonului și a inductorului sintezei sale endogene, amixina.

Prevenirea specifică a hepatitei A

Seroprofilaxia hepatitei A cu gamaglobulină, utilizată anterior pe scară largă, nu s-a justificat, prin urmare, accentul principal s-a pus pe efectuarea profilaxiei vaccinale, vaccinarea împotriva hepatitei A fiind efectuată. În acest scop, se dezvoltă și se utilizează deja diverse tipuri de vaccinuri. În Rusia, un vaccin eficient împotriva hepatitei A a fost obținut în 1995 și este utilizat acum cu succes.