Microscopie confocală

Microscopia confocală este considerată în prezent una dintre cele mai promițătoare metode de imagistică in vivo a pielii, motiv pentru care interesul pentru aceasta este neobișnuit de mare atât în rândul clinicienilor, cât și al reprezentanților institutelor de cercetare.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Capacități de microscopie confocală

În dermatologie, microscopia confocală cu laser este utilizată pentru:

• studiul penetrării compușilor în piele (căi de penetrare, cinetică, distribuție în piele);
• observarea funcționării glandelor (determinarea stării active și pasive);
• studii ale patului microcirculator (inclusiv în timp real);
• diagnosticul neoplasmelor.

Fără a discuta avantajele și dezavantajele tipurilor de microscopie confocală menționate mai sus, observăm că, în ultimii ani, microscopia confocală cu laser fluorescent a devenit din ce în ce mai populară.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Microscopie confocală pentru examinarea pielii

Microscopul confocal oferă două oportunități neprețuite - studiul țesuturilor la nivel celular aflate într-o stare de activitate vitală fiziologică și demonstrarea rezultatelor studiului (adică a activității celulare) în patru dimensiuni - înălțime, lățime, adâncime și timp. Pentru calitatea imaginii și profunzimea studiului, cel mai important rol îl joacă capacitatea țesutului de a transmite lumina, cu alte cuvinte, transparența sa. Metoda de microscopie confocală este fără contact, fasciculul luminos nu provoacă niciun prejudiciu sau disconfort pacientului examinat sau animalului de experimente.

Microscopia confocală cu scanare laser (CSLM) este utilizată pentru examinarea pielii. Metoda permite vizualizarea epidermei și a stratului papilar al dermului cu o rezoluție apropiată de cea histologică. Toate rezultatele examinării sunt afișate pe monitor și salvate ca un pachet de fișiere imagine (sub formă de microfilm (în dinamică) sau microfotografii).

Există două tipuri ale metodei:

• reflexiv (reflectanță CSLM) - bazat pe faptul că diverse structuri intracelulare și intercelulare au indici de refracție ai luminii diferiți, ceea ce permite obținerea unei imagini de contrast.
• fluorescență (CSLM cu fluorescență) - utilizează lumina laser care pătrunde în piele și excită exo- sau endocromoforii din aceasta, care, ca răspuns, încep să emită fotoni (adică să dea fluorescență).

Rezoluția laterală este distanța minimă dintre punctele situate pe un plan orizontal, adică un plan paralel cu suprafața pielii. Rezoluția axială este distanța minimă dintre punctele situate pe un plan perpendicular pe suprafața pielii.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Istoricul microscopiei confocale

Ideea creării unui microscop capabil să arate o secțiune de țesut viu la nivel celular a fost dezvoltată activ în urmă cu 130 de ani. Elementul principal al microscoapelor moderne a fost proiectat la sfârșitul secolului al XIX-lea și era un disc rotativ cu găuri minuscule dispuse în spirală. Acest disc a fost inventat în 1883 de studentul german Paul Nipkow, după care a fost numit - discul Nipkow (sau discul Nipkow). Invenția s-a bazat pe capacitatea luminii, care trece prin găuri minuscule din disc și o lupă, de a pătrunde adânc în țesut și de a ilumina un fragment de celulă aflat la distanță de suprafață. Când discul se rotește rapid, fragmentele formează o singură imagine. Prin deplasarea structurii departe sau mai aproape de obiect, este posibil să se varieze adâncimea secțiunii optice a țesutului studiat.

Abia odată cu apariția videoînregistrătoarelor în anii 1980 și a computerelor capabile să proceseze imagini la începutul anilor 1990 a devenit posibilă crearea și utilizarea eficientă a microscoapelor moderne care sunt folosite astăzi.