Vitamina A în sânge

Valori de referință (normă) pentru concentrația de vitamina A (retinol) în serul sanguin: la copii 1-6 ani - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 ani - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 ani - 0,91-2,51 μmol/l; la adulți - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamina A este o vitamină liposolubilă și există sub două forme: vitamina A propriu-zisă, sau retinol (care se găsește doar în produsele de origine animală) și provitamina A, cunoscută sub numele de caroten (obținută din produse animale și vegetale), care poate fi transformată în retinol în pereții tractului digestiv. Aproximativ 50-90% din retinolul alimentar este absorbit în intestinul subțire și transportat într-un complex legat de chilomicroni la ficat, unde este stocat sub formă de palmitat de retinol. Când este necesar, este eliberat în fluxul sanguin sub formă de retinol complexat cu proteina care leagă vitamina A. În serul sanguin, complexul proteina care leagă vitamina A + retinol se leagă de transtiretină. Din serul sanguin, retinolul este preluat de celulele țintă, cum ar fi fotoreceptorii retinei și ai epiteliului.

Când organismul primește vitamina A în cantități care depășesc necesarul (180-430 mcg de retinol pe zi, în funcție de vârstă, sex și stare fiziologică), excesul acesteia se depune în ficat, formând un depozit al acestei vitamine. Când aportul de retinol cu alimente este redus, rezervele sale din ficat sunt eliberate în fluxul sanguin, menținând concentrația de retinol din serul sanguin la un nivel normal (peste 0,7 μmol/l). Alte forme biologic active ale vitaminei A (acidul retinal și acidul retinoic) sunt prezente în sânge în concentrații foarte mici (sub 0,35 μmol/l); esterii retinolului reprezintă aproximativ 5% din cantitatea totală de vitamina A (0,1-0,17 μmol/l).

Vitamina A joacă un rol important în procesele de oxidare-reducere. Retinolul promovează formarea glicogenului în ficat și mușchi, ajută la creșterea conținutului de colesterol din sânge și participă la sinteza hormonilor steroizi și sexuali. Este necesar pentru creșterea și formarea sistemului osos, resinteza rodopsinei și, de asemenea, promovează funcționarea normală a membranelor mucoase și a epiteliului tegumentar al pielii, prevenind metaplazia, hiperkeratoza și exfolierea excesivă a acesteia. Vitamina A ajută la întărirea părului, dinților și gingiilor. În ultimii ani, a fost demonstrat rolul divers al vitaminei A în prevenirea cancerului și reglarea imunității (este necesară pentru finalizarea fagocitozei, crește sinteza Ig, stimulează formarea de T-killers, stimulează T-helpers de tip II etc.). Vitamina A este un antioxidant activ, acționând în principal în prezența vitaminei E; protejează vitamina C de oxidare. Deficitul de vitamina A este considerat un factor de risc pentru neoplasmele maligne. Studiile experimentale au arătat că creșterea conținutului de vitamina A în dietă crește speranța mediană de viață cu 17,5%. Zincul este un cofactor esențial în metabolismul vitaminei A (necesară pentru sinteza proteinei care leagă vitamina A).

Necesarul zilnic mediu de retinol pentru adulți (20-50 de ani) este de 1,2 mg (4000 UI, 1 UI este echivalentul a 0,3 mcg de retinol), pentru femeile însărcinate - 1,5 mg (5000 UI), pentru femeile care alăptează - 1,8 mg (6000 UI), pentru persoanele cu vârsta peste 60 de ani - 2,5 mg (10.000 UI). Cel puțin o treime din necesarul zilnic de retinol trebuie furnizat organismului sub formă finită; restul poate fi acoperit prin consumul de carotenoizi, din care se formează retinolul în organism. Trebuie ținut cont de faptul că aproximativ 30% din retinolul din produsele alimentare este distrus în timpul tratamentului termic. Activitatea retinolului este de 2 ori mai mare decât cea a carotenului, în plus, doar 30-40% din acesta din urmă este absorbit în intestin. Prin urmare, atunci când se evaluează dieta, se consideră că 1 mg de retinol este aproximativ echivalent cu 6 mg de carotenoizi.

Determinarea retinolului (vitamina A) și a carotenoizilor în serul sanguin conform lui Bessey, modificat de L.A. Anisimova

Principiul metodei

Determinarea vitaminei A și a carotenoizilor se bazează pe hidroliza acestora într-o soluție alcalină de alcool, urmată de extracție cu un amestec de solvenți organici.

Reactivi

• Soluție 11 M de hidroxid de potasiu (KOH).
• 96% alcool etilic.
• Soluție 1 M de hidroxid de potasiu (KOH) în alcool etilic 96%: 1 volum de soluție 11 M de KOH se amestecă cu 10 volume de alcool etilic 96%. Reactivul se prepară în ziua studiului. Dacă apare colorare în timpul amestecării, alcoolul trebuie purificat prin distilare înainte de utilizare.
• Xilen, chimic pur
• Octan, chimic pur
• Amestec xilen-octan: preparat prin amestecarea unor volume egale de xilen și octan.

Studiile sunt efectuate cu ajutorul unui spectrofotometru.

Procesul de determinare a vitaminei A

Sângele prelevat de pe deget (aproximativ 1 ml) se introduce într-un tub de centrifugă și se introduce într-o cană de sticlă cu apă caldă (temperatura 40-45°C) timp de 20-30 de minute. Pentru a separa serul, cheagul de sânge este tras cu grijă în jurul marginii pereților tubului cu o tijă subțire de sticlă și se centrifugează la 3000 rpm timp de 10 minute.

Se colectează 0,12 ml de ser și se transferă într-un tub de aglutinare, unde se adaugă apoi 0,12 ml de soluție 1 M de alcool hidroxid de potasiu. Conținutul se agită bine.

Eprubetele cu probe se plasează într-o baie de apă timp de 20 de minute la o temperatură de 60°C pentru a efectua hidroliza.

Probele sunt răcite și li se adaugă 0,12 ml de amestec xilen-octan, apoi se agită energic timp de 10-15 secunde. Se răcesc din nou și se centrifugează.

Stratul superior care conține vitamina A și carotenoizi este îndepărtat cu grijă folosind o pipetă Pasteur cu balon de cauciuc și transferat în microcuvete.

Probele sunt spectrofotomizate la o lungime de undă de 328 nm pentru a determina vitamina A și la o lungime de undă de 460 nm pentru a determina carotenoizii.

După spectrofotometrie, probele sunt expuse la radiații ultraviolete pentru a distruge vitamina A. În acest scop, se instalează o lampă de cuarț (bactericidă) la o distanță de 15-20 cm de microcuvete, astfel încât partea cuvei umplută cu lichid să fie expusă radiațiilor; timpul de iradiere este de 45-60 min.

Probele sunt respectrofotomizate la o lungime de undă de 328 nm. Conținutul de vitamina A este determinat prin diferența dintre valorile de extincție (densitatea optică) ținând cont de coeficientul (factorul) 637 calculat de Bessey pentru vitamina A.

Calculul se efectuează conform formulei:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Unde X este conținutul de vitamina A, în μg/dl; 637 este coeficientul calculat de Bessey pentru determinarea vitaminei A; E328(1) este densitatea optică a soluției înainte de iradiere; E328(2) este densitatea optică a soluției după iradiere.

Coeficientul pentru conversia concentrației de vitamina A de la µg/dL la µmol/L este 0,035.

Conținutul de carotenoizi se calculează folosind formula:

X = 480 - E480,

Unde X este conținutul de carotenoizi, în μg/dl; 480 este coeficientul calculat de Bessey pentru determinarea carotenoizilor; E480 este densitatea optică a soluției de testat.

Nota

Conform lui Bessey, un volum mai mare sau mai mic de ser poate fi utilizat atunci când se efectuează cercetări, dar raportul său față de volumul soluției de alcool trebuie să fie constant cu orice modificare a volumului (cantității) amestecului xilen-octan.

Conținutul normal de vitamina A în serul sanguin este: la nou-născuți și sugari - 160-270 μg/l; la adulți - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Conținutul de carotenoizi în serul sanguin al adulților este de 800-2300 μg/l.