Imunofenotipizarea hemoblastozelor

Progresele semnificative înregistrate în cercetarea hematologică în ultimii ani sunt asociate cu utilizarea metodelor imunologice moderne și a mijloacelor automate de analiză și sortare a celulelor din sângele periferic și măduva osoasă - citometrele de flux. Studiile morfologice și citochimice tradiționale ale celulelor substrat ale bolii (sânge, măduvă osoasă roșie, ganglioni limfatici, splină etc.) în multe cazuri, în special în bolile limfoproliferative, nu ne permit să identificăm întreaga varietate de variante între formele similare morfologic și să stabilim sursa de origine a clonei patologice. Aceste probleme pot fi rezolvate doar prin studierea caracteristicilor imunologice ale celulelor. Fiecare etapă de diferențiere a celulelor hematopoietice corespunde unui set propriu de antigene, care, conform clasificării internaționale, se numesc diferențiere și sunt împărțite în clustere de diferențiere, denumite CD.

În modificările neoplazice, un bloc de diferențiere poate apărea în orice stadiu al dezvoltării celulare normale, rezultând formarea unei clone de celule patologice care determină substratul bolii și au aceleași caracteristici imunologice (sau fenotipice). Prin efectuarea studiilor acestor markeri pe celule, este posibil să se determine cărei forme și variante a bolii corespund, adică, pe baza fenotipului imunologic al celulelor, să se efectueze diagnosticul diferențial, ceea ce este cel mai dificil în bolile limfoproliferative, deoarece celula principală a substratului patologic al bolii sunt celule aproape identice din punct de vedere morfologic.

Fenotiparea permite utilizarea anticorpilor monoclonali pentru a tipa celulele blastice și mature ale sângelui din seria mielo-, mono- și limfocitară prin prezența antigenelor (receptorilor) de diferențiere în peretele celular. Secțiunea „Evaluarea stării imune a organismului” descrie parțial caracteristicile și valoarea diagnostică a studiului markerilor celulari; mai jos este o scurtă descriere a markerilor antigenici ai celulelor în raport cu diagnosticul hemoblastozelor. Următorii antigeni (markeri) pot fi detectați pe membranele celulelor sanguine și ale măduvei osoase roșii.

• CD2 este o glicoproteină transmembranară monomerică. Este prezentă pe suprafața tuturor limfocitelor T care circulă în sânge și pe unele limfocite NK. CD2 este implicată în procesul de activare alternativă a limfocitelor T. Detectarea CD2 folosind anticorpi monoclonali în practica clinică este utilizată pentru fenotiparea leucemiei acute cu celule T, a limfoamelor, a afecțiunilor inflamatorii cronice și a imunodeficienței.
• CD3 este un complex proteic asociat cu receptorul specific antigenului celulelor T, fiind principalul marker funcțional al limfocitelor T. Acesta facilitează transferul semnalului de activare de la membrană la citoplasma celulară. Determinarea CD3 este indicată pentru diagnosticarea leucemiei acute cu celule T, a limfoamelor (CD3 nu este exprimat în neoplasmele limfoide non-celule T) și a bolilor imunodeficitare.
• CD4 este o glicoproteină transmembranară exprimată de o subpopulație de limfocite T-helper (inductori), care constituie 45% din limfocitele din sângele periferic. În stadiile incipiente ale dezvoltării limfocitelor în timus, antigenele CD4, precum și CD8, sunt exprimate de toate limfocitele corticale. Timocitele medulare, al căror fenotip este similar cu cel al celulelor T CD4+ mature din sângele periferic (T-helper), exprimă deja fie receptori CD4, fie CD8. În sângele periferic, până la 5% din celule poartă atât markeri CD4, cât și CD8. O expresie minoră a CD4 este posibilă pe unele celule din seria monocitară. CD4 este exprimat în majoritatea cazurilor de limfoame cu celule T, inclusiv micoza fungoidă, precum și în leucemia cu celule T asociată cu HTLV (HTLV - virusul limfotrop T uman).
• CD5 este o glicoproteină cu lanț unic prezentă pe toate limfocitele T mature și pe majoritatea timocitelor și este slab exprimată de limfocitele B. CD5 este detectat pe celulele neoplazice ale leucemiei limfocitare cronice cu celule B și ale limfomului centrocitar. În alte tipuri de boli limfoide maligne - limfom folicular, leucemie cu celule păroase, limfom cu celule mari - CD5 nu este exprimat.
• CD7 este o proteină cu lanț unic, cel mai timpuriu marker al diferențierii celulelor T. Este exprimată de limfocitele pro-T chiar înainte de migrarea lor către timus. CD7 este detectat pe majoritatea celulelor NK, o expresie slabă fiind observată pe monocite. Limfocitele B și granulocitele nu conțin acest antigen. Determinarea CD7 este utilizată pentru diagnosticarea limfoamelor, a leucemiei limfoblastice cu celule T din copilărie.
• CD8 este o proteină formată din două lanțuri polipeptidice legate prin punți disulfidice. Este exprimată de o subpopulație de limfocite T citotoxice și supresoare, care reprezintă 20-35% din limfocitele din sângele periferic. Acest antigen este exprimat și de limfocitele NK, timocitele corticale, 30% din timocitele medulare și o subpopulație de celule roșii din măduva osoasă. CD8 este studiat pentru a cuantifica conținutul de supresoare T (vezi secțiunea „Limfocite T supresoare în sânge” de mai sus).

• CD10 este o endopeptidază asociată membranei celulare. CD10 este exprimată de formele tinere de limfocite B și de o subpopulație de limfocite corticale. CD10 este exprimată de toate celulele ALL.
• CD11c este exprimat pe membrana celulară de macrofage, monocite, granulocite, celule NK și celule leucemice cu celule păroase.
• CD13 este o glicoproteină exprimată de celulele liniei mielomonocitare (celule progenitoare, neutrofile, bazofile, eozinofile, monocite și celule de leucemie mieloidă). Este absentă din limfocitele T și B, eritrocite și trombocite.
• CD14 este o glicoproteină a membranei de suprafață. Este exprimată în principal de monocite și macrofage. CD14 este detectat pe peste 95% din monocitele din sângele periferic și măduva osoasă. Expresia puternică a CD14 este observată în leucemia mieloblastică acută. Acest antigen nu este exprimat în leucemia limfoblastică acută și cronică.
• CD15 este un oligozaharid. Este implicat în fagocitoză și chemotaxie. Acest antigen este prezent pe suprafața granulocitelor mature și a celulelor Berezovsky-Sternberg. Expresia antigenului CD15 este detectată în boala Hodgkin. În limfoamele non-Hodgkin, CD15 nu este detectat în majoritatea cazurilor.
• CD16 este exprimat pe suprafața granulocitelor, monocitelor, macrofagelor și celulelor NK. Toate limfocitele care exprimă acest antigen au capacitatea de citotoxicitate celulară dependentă de anticorpi. CD16 este determinat în timpul tipizării leucemiilor mielocitare cronice, pentru a caracteriza celulele NK.
• CD19 este o glicoproteină prezentă pe toate limfocitele B periferice și pe toți precursorii celulelor B. Este absentă din plasmocite. Este cel mai timpuriu marker al celulelor B și joacă un rol important în reglarea activării și proliferării celulelor B. CD19 este exprimată pe toate celulele neoplazice ale leucemiei acute de origine a celulelor B și este prezentă și în unele forme de leucemie acută monoblastică.
• CD20 este o proteină neglicozilată. În ontogeneza limfocitelor B, antigenul CD20 apare după CD19 în stadiul de pre-diferențiere a limfocitelor în celulele B. Acesta este absent din membrana plasmatică a celulelor plasmatice. Este exprimat în LAL, leucemia limfocitară cronică cu celule B, leucemia cu celule păroase, limfomul Burkitt și foarte rar în leucemia monoblastică acută.
• CD21 este o glicoproteină prezentă în cantități semnificative pe limfocitele B din organele limfoide și în cantități mici pe celulele B din sângele periferic. CD21 este un receptor pentru virusul Epstein-Barr.
• CD22 este o proteină formată din două lanțuri polipeptidice. Este exprimată pe membrana majorității limfocitelor B, inclusiv a celulelor precursoare (prolimfocite). Antigenul nu este exprimat pe limfocite B (plasmocite) după activarea lor. Cea mai pronunțată expresie a CD22 este detectată pe celulele din leucemia cu celule păroase, slabă - în leucemia mieloidă și în leucemia linfocitară non-T (ALL).
• CD23 este o glicoproteină exprimată într-o măsură mult mai mare de limfocitele B activate din sângele periferic. CD23 mediază citotoxicitatea dependentă de IgE și fagocitoza de către macrofage și eozinofile.
• CD25 este o glicoproteină cu lanț unic identificată ca un receptor cu afinitate scăzută pentru IL-2. Acest receptor este exprimat pe limfocitele T activate și, într-o densitate mai mică, pe celulele B activate. În sângele periferic al persoanelor sănătoase, antigenul este prezent în peste 5% din celulele limfoide.
• CD29 este un receptor de fibronectină. Este distribuit pe scară largă în țesuturi și este exprimat de leucocite. Detectarea CD29 pe celulele sanguine periferice este utilizată pentru a tipa o subpopulație de celule T cu fenotipul CD4+CD29+, care sunt numite celule helper de tip 2 (Th2). Aceste celule participă la răspunsul imun umoral prin producerea de limfokine.
• CD33 este o glicoproteină transmembranară. Este prezentă pe suprafața celulelor din seria mieloidă și monocitară. Se găsește pe suprafața monocitelor și, într-o măsură mai mică, a granulocitelor din sângele periferic. Aproximativ 30% din celulele măduvei osoase roșii exprimă CD33, inclusiv mieloblastele, promielocitele și mielocitele. Antigenul este absent din membranele celulelor stem pluripotente. Determinarea CD33 este utilizată pentru a caracteriza celulele din leucemiile de origine mieloidă. Celulele leucemice de origine limfoidă și eritroidă nu exprimă CD33.
• CD34 este o fosfoglicoproteină exprimată de celulele progenitoare hematopoietice, inclusiv de celulele stem monopotente. Cea mai pronunțată expresie a Ag este observată la progenitorii timpurii; pe măsură ce celulele maturează, expresia markerilor scade. CD34 se găsește și pe celulele endoteliale. Determinarea CD34 este utilizată pentru a caracteriza celulele în leucemiile mieloblastice și limfoblastice acute. În leucemiile limfocitare cronice și limfoame, expresia antigenului CD34 nu este detectată.

• CD41a este exprimat de trombocite și megacariocite. Anticorpii monoclonali pentru detectarea CD41a sunt utilizați pentru diagnosticarea leucemiei megacarioblastice. În trombastenia Glanzmann, exprimarea acestui antigen este absentă sau semnificativ suprimată.
• CD42b este o glicoproteină membranară formată din două lanțuri polipeptidice. Markerul este detectat pe suprafața trombocitelor și megacariocitelor. În practica clinică, detectarea CD42b este utilizată pentru a diagnostica trombocitopatia - sindromul Bernard-Soulier.
• CD45RA aparține clasei glicoproteinelor transmembranare. Este un antigen leucocitar comun. Este exprimat pe membrana celulară a limfocitelor B, într-o măsură mai mică a limfocitelor T și pe timocitele medulare mature. Markerul nu este exprimat de granulocite.
• CD45RO este o izoformă cu greutate moleculară mică a CD45RA, un antigen leucocitar comun. Este detectat pe celulele T (limfocite T de memorie), o subpopulație de limfocite B, monocite și macrofage. Anticorpii monoclonali împotriva CD45RO interacționează cu majoritatea timocitelor, o subpopulație de limfocite T CD4+ și CD8+ în repaus și cu celulele T mature activate. Celulele de origine mielomonocitară, granulocitele și monocitele sunt, de asemenea, purtătoare ale acestui antigen. Este detectat în limfoamele centroblastice și imunoblastice.
• CD46 este un dimer O-glicozilat. Este distribuit pe scară largă în țesuturi și este exprimat de limfocitele T și B, monocite, granulocite, celule NK, trombocite, celule endoteliale, fibroblaste, dar este absent de pe suprafața globulelor roșii. CD46 oferă protecție tisulară față de complement.
• CD61 este un antigen plachetar. Este exprimat pe trombocitele din sângele periferic și măduva osoasă roșie, precum și pe megacariocite și megacarioblaste. Determinarea sa este utilizată ca marker în leucemia megacarioblastică acută. Expresia antigenului este absentă sau suprimată la pacienții cu trombastenie Glanzmann.
• CD95, numită și Fas sau APO-1, este o glicoproteină transmembranară, membră a familiei receptorilor factorului de necroză tumorală. Este exprimată în cantități semnificative pe limfocitele T (CD4+ și CD8+) din sângele periferic și, într-o măsură mai mică, pe limfocitele B și celulele NK. Acest antigen este exprimat și pe granulocite, monocite, celule tisulare și celule neoplazice. Legarea CD95 la ligandul Fas (CD95L) induce apoptoza în celule.
• CD95L, sau ligandul Fas, este o proteină membranară aparținând familiei receptorilor factorului de necroză tumorală. Acest antigen este exprimat de limfocitele T citotoxice, celulele NK și, foarte adesea, de celulele tumorale; este principalul inductor al apoptozei în celule.
• HLA-DR este un determinant monomorfic al moleculelor de clasa II ale complexului major de histocompatibilitate (HLA) uman. Markerul este exprimat pe celulele Langerhans, celulele dendritice ale organelor limfoide, anumite tipuri de macrofage, limfocite B, celule T activate și celule epiteliale timice. Studiul acestui marker este utilizat pentru determinarea cantitativă a limfocitelor T activate cu fenotipul CD3+ HLA-DR+.

Folosind o selecție diferită de anticorpi monoclonali împotriva markerilor, este posibil să se creeze un portret fenotipic al celulelor caracteristice unei anumite forme de leucemie.

Pe lângă utilizarea metodelor de imunofenotipare pentru diagnosticul și diagnosticul diferențial al hemoblastozelor, utilizarea lor în procesul de tratament pentru evaluarea stării de remisie și a populației reziduale de celule leucemice s-a dovedit a fi deosebit de importantă. Cunoscând „portretul” fenotipic al celulelor blastice în perioada de diagnostic, acești markeri permit detectarea celulelor clonei leucemice în perioada de remisie și, prin creșterea numărului acestora, prezicerea dezvoltării unei recidive cu mult înainte (1-4 luni) de apariția semnelor clinice și morfologice ale acesteia.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]