Tot conținutul iLive este revizuit din punct de vedere medical sau verificat pentru a vă asigura cât mai multă precizie de fapt.
Avem linii directoare de aprovizionare stricte și legătura numai cu site-uri cu reputație media, instituții de cercetare academică și, ori de câte ori este posibil, studii medicale revizuite de experți. Rețineți că numerele din paranteze ([1], [2], etc.) sunt link-uri clickabile la aceste studii.
Dacă considerați că oricare dintre conținuturile noastre este inexactă, depășită sau îndoielnică, selectați-o și apăsați pe Ctrl + Enter.
Analiza polimorfismului lungimii fragmentelor de restricție
Expert medical al articolului
Ultima examinare: 05.07.2025
Utilizarea pe scară largă a diferitelor endonucleaze de restricție pentru analiza ADN-ului cromozomial a relevat o variabilitate enormă a genomului uman. Chiar și mici modificări ale regiunilor codificatoare și reglatoare ale genelor structurale pot duce la încetarea sintezei unei anumite proteine sau la pierderea funcției acesteia în organismul uman, ceea ce afectează de obicei fenotipul pacientului. Cu toate acestea, aproximativ 90% din genomul uman este format din secvențe necodificatoare, care sunt mai variabile și conțin multe așa-numite mutații neutre, sau polimorfisme, și nu au expresie fenotipică. Astfel de regiuni polimorfice (loci) sunt utilizate în diagnosticul bolilor ereditare ca markeri genetici. Loci polimorfici sunt prezenți în toți cromozomii și sunt legați de o regiune specifică a genei. Prin determinarea localizării unui locus polimorfic, este posibil să se stabilească ce genă este asociată cu mutația care a cauzat boala la pacient.
Pentru izolarea regiunilor polimorfice de ADN, se utilizează enzime bacteriene - restrictaze, al căror produs sunt situsuri de restricție. Mutațiile spontane care apar în situsurile polimorfice le fac rezistente sau, dimpotrivă, sensibile la acțiunea unei restrictaze specifice.
Variabilitatea mutațională în situsurile de restricție poate fi detectată prin modificarea lungimii fragmentelor de restricție ale ADN-ului prin separarea acestora folosind electroforeza și hibridizarea ulterioară cu sonde ADN specifice. În absența restricției într-un situs polimorfic, un fragment mare va fi detectat pe electroforegrame, iar în prezența acestuia, va fi prezent un fragment mai mic. Prezența sau absența unui situs de restricție în loci identici ai cromozomilor omologi permite o marcare destul de fiabilă a genei mutante și normale și urmărirea transmiterii acesteia la urmași. Astfel, atunci când se studiază ADN-ul pacienților în ambii cromozomi în care este prezent un situs de restricție într-o regiune polimorfă, se vor detecta fragmente scurte de ADN pe electroforegramă. La pacienții homozigoți pentru o mutație care modifică situsul de restricție polimorfic, se vor detecta fragmente mai lungi, iar la pacienții heterozigoți, fragmente scurte și lungi.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]