Cariotiparea

Culturile de sânge pe termen scurt, celulele din măduva osoasă și culturile de fibroblaste sunt cel mai adesea utilizate pentru studierea cromozomilor. Sângele cu anticoagulant livrat la laborator este centrifugat pentru a sedimenta eritrocitele, iar leucocitele sunt incubate într-un mediu de cultură timp de 2-3 zile. Fitohemaglutinina este adăugată în proba de sânge, deoarece accelerează aglutinarea eritrocitelor și stimulează diviziunea limfocitelor. Cea mai potrivită fază pentru studierea cromozomilor este metafaza mitozei, așa că se utilizează colchicina pentru a opri diviziunea limfocitelor în această etapă. Adăugarea acestui medicament în cultură duce la o creștere a proporției de celule în metafază, adică în etapa ciclului celular când cromozomii sunt cel mai vizibili. Fiecare cromozom se replică (își produce propria copie) și, după colorarea corespunzătoare, este vizibil ca două cromatide atașate la centromer sau constricție centrală. Celulele sunt apoi tratate cu o soluție hipotonică de clorură de sodiu, fixate și colorate.

Pentru colorarea cromozomilor, cel mai adesea se utilizează colorantul Romanovsky-Giemsa, acetcarmină 2% sau acetarseină 2%. Aceștia colorează cromozomii în întregime, uniform (metodă de rutină) și pot fi utilizați pentru detectarea anomaliilor numerice ale cromozomilor umani.

Pentru a obține o imagine detaliată a structurii cromozomilor, pentru a identifica (defini) cromozomii individuali sau segmentele acestora, se utilizează diverse metode de colorare diferențială. Cele mai frecvent utilizate metode sunt Giemsa, precum și benzile G și Q. La examinarea microscopiei preparatului de-a lungul cromozomului, se evidențiază o serie de benzi colorate (heterocromatină) și necolorate (eucromatină). Natura striației transversale obținute în acest mod permite identificarea fiecărui cromozom din set, deoarece alternanța benzilor și dimensiunile acestora sunt strict individuale și constante pentru fiecare pereche.

Plăcile metafazice ale celulelor individuale sunt fotografiate. Cromozomii individuali sunt decupați din fotografii și lipiți în ordine pe o foaie de hârtie; această imagine a cromozomilor se numește cariotip.

Utilizarea colorărilor suplimentare, precum și a noilor metode de obținere a preparatelor cromozomiale care permit întinderea cromozomilor în lungime, cresc semnificativ precizia diagnosticului citogenetic.

A fost elaborată o nomenclatură specială pentru a descrie cariotipul uman. Cariotipul normal al unui bărbat și al unei femei este desemnat ca 46, XY și respectiv 46, XX. În sindromul Down, caracterizat prin prezența unui cromozom 21 suplimentar (trisomia 21), cariotipul unei femei este descris ca 47, XX 21+, iar cel al unui bărbat este 47, XY, 21+. În prezența unei anomalii structurale a cromozomului, este necesar să se indice brațul lung sau scurt modificat: litera p denotă brațul scurt, q denotă brațul lung, iar t denotă translocația. Astfel, în cazul deleției brațului scurt al cromozomului 5 (sindromul cri du chat), cariotipul feminin este descris ca 46, XX, 5p-. Mama unui copil cu sindrom Down cu translocație, purtătoare a translocației echilibrate 14/21, are un cariotip de 45, XX, t(14q; 21q). Cromozomul de translocație se formează prin fuziunea brațelor lungi ale cromozomilor 14 și 21, iar brațele scurte se pierd.

Fiecare braț este împărțit în regiuni, care la rândul lor sunt împărțite în segmente, ambele fiind desemnate prin cifre arabe. Centromerul cromozomului este punctul de plecare pentru numărarea regiunilor și segmentelor.

Astfel, pentru topografia cromozomilor se folosesc patru etichete: numărul cromozomului, simbolul brațului, numărul regiunii și numărul segmentului din cadrul regiunii. De exemplu, intrarea 6p21.3 înseamnă că vorbim despre cromozomul 6 al celei de-a 6-a perechi, brațul său scurt, regiunea 21, segmentul 3. Există, de asemenea, simboluri suplimentare, în special pter - capătul brațului scurt, qter - capătul brațului lung.

Metoda citogenetică de cercetare permite detectarea delețiilor și a altor modificări ale cromozomilor doar cu o dimensiune de aproximativ 1 milion de baze (nucleotide).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]